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背景

许多人类疾病都与异常的跨膜蛋白功能有关,跨膜蛋白的多功能性使它们成为理想的药物作用靶点。大多数抗体药靶点都是针对跨膜或分泌型蛋白分子。根据蛋白结构不同,跨膜蛋白的穿膜区可以有多种穿膜方式,包括单次,两次,三次,甚至12次,等。现在常用的解决方案为在细胞裂解液中加入洗涤剂或者通过蛋白工程方案去除穿膜区再表达蛋白。基因工程改造去除穿膜区会导致蛋白结构和天然结构不一致,引起功能丢失等问题。VLP从结构上非常类似病毒颗粒,但是其不带病毒基因组,因此不具备感染力(见右图)。

VLP(Virus like particle)(病毒类颗粒)是细胞在感染病毒后会从细胞膜表面通过一种类似细胞膜出芽的方式分泌100-150nm左右的纳米颗粒。这种VLP颗粒带有完整的磷脂双分子层膜结构,膜蛋白都会以天然穿膜状态展示。因为VLP以类似纳米颗粒状态存在,因此我们可以应用VLP做常规的生化分析,这包括ELISA,SPR亲和力分析,噬菌体展示筛选试验,蛋白标记和细胞结合实验,Flow Virometry分析,等。同时因为膜蛋白在VLP结构上以类似细胞膜表面展示状态,因此VLP也可以作为功能性蛋白抗原应用于开发功能性抗体。

解决方案

多次跨膜蛋白结构复杂,具有多个疏水跨膜区,在宿主细胞中表达水平低,制备困难,而且对蛋白表达生产平台技术要求极高。而具有天然构象和完整活性的膜蛋白,对于筛选具有治疗功能的跨膜蛋白抗体至关重要,已成为急需解决的难题。尽管如此,科学家仍不断努力通过多种策略来制备合适的多跨膜抗原,VLP的出现成为多跨膜蛋白完美的解决方案。

缔码生物VLP包装过程(Claudin18.2为例)


缔码VLP包装平台

  1. 缔码生物专门搭建了基于293表达系统的VLP技术平台,将构象完整的膜蛋白直接聚集在细胞表面,使这些复杂的膜蛋白转变为可溶性的、高浓度的蛋白用于抗体免疫和筛选,所制备的包膜VLPs在其固有的细胞膜上显示正确折叠的多次跨膜蛋白,从而能够诱导和筛选识别靶标天然构象的功能性抗体。
  2. 缔码生物除提供VLP技术平台下常规生产的多次跨膜蛋白之外,同时也接收定制服务。

应用场景

免疫 检测 筛选


VLP可以作为全长蛋白免疫动物,获得更多表位的抗体;

  1. 可以应用于流式,Elisa,来检测相对应的抗体或CAR结构在转导的T细胞表达水平分析。
  2. 应用SPR或Biacore技术检测抗多穿膜蛋白抗体的亲和力指数
  3. 膜蛋白和其配体反应检测


用于针对膜蛋白抗体的噬菌体展示库筛选


预制VLP产品目录

Claudin18.1-VLP
Claudin18.2-VLP
GPRC5D-VLP
CCR8-VLP
CD24-VLP
CCR4-VLP


产品特性

1.Elisa data:


ELISA plates were pre-coated with 0.5ug/per well purified human Claudin 18.2 VLP. Serial diluted Anti-Claudin18.2 monoclonal antibody (Zolbetuximab biosililar; IMAB362) solutions were added, washed, and incubated with secondary antibody before ELISA reading. From above data, the EC50 for IMAB362 binding with Claudin18.2 is 15.37ng/ml.

2.Flow virometry analysis of Claudin18.2-VLP particles

  1. Negative Control 1: Claudin18.2 VLP samples were stained only with Goat anti-human IgG Fc-PE secondary antibody.
  2. Negative Control 2: Control VLP samples were stained with anti-Claudin18.2 antibody(Zolbetuximab biosililar; IMAB362)at 1ug/mL, followed by Goat anti-human IgG Fc-PE secondary antibody. 
  3. Negative Control 3: Claudin18.2 VLP samples were stained with anti-BCMA antibody(an irrelevant antibody)at 1ug/mL, followed by Goat anti-human IgG Fc-PE secondary antibody. 
  4. Claudin18.2 VLP samples were stained with anti-Claudin18.2 antibody(Zolbetuximab biosililar; IMAB362)at 1ug/mL, followed by Goat  anti-human IgG Fc-PE secondary antibody. 

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